Процедура визначення груп крові за системою АВОполягає у виявленні антигенів А і В в еритроцитах за допомогою стандартних антитіл і використанням агглютінінов в плазмі або сироватці аналізованої крові стандартними еритроцитами. Методика розроблена на початку XX століття і до сих пір активно застосовується в медицині. Визначення антигенів А і В здійснюється завдяки Цоліклони анти-А і анти-В.

Основні поняття

У донорів завжди визначаються не тільки антигенив еритроцитах, але і аглютиніни в сироватці (плазмі) із застосуванням стандартних еритроцитів. Як біоматеріалу використовується венозна кров. Перед дослідженням необхідно відмовитися від жирної їжі за добу до аналізу і не курити за півгодини до здачі тесту. Групи крові визначають двічі: спочатку в лікувальному відділенні, де заготовлюється матеріал, а потім підтверджують дослідженням в лабораторії.

визначення групи крові системи АВО перехресним способом

Визначення груп крові за системою АВО єосновним тестом, який використовується в трансфузіології. Також подібна система груп крові є у деяких тварин, наприклад у шимпанзе, горил і бонобо.

Історія відкриття

У науці існує загальноприйнята думка про те, щометодика визначення груп крові за системою АВО була виявлена ​​вперше Карлом Ландштейнером, австрійським вченим, в 1900 році. Тоді він описав у своїй праці три типи антигенів. За це через тридцять років йому було присуджено Нобелівську премію з медицини і фізіології. Через те, що між вченими раніше не було тісних зв'язків, пізніше встановили, що чеський лікар-серолог Ян Янський незалежно від пошуків К. Ландштейнера вперше описав чотири групи крові людини, але його дослідження були не відомі широкій аудиторії. В даний час саме класифікація, розроблена Я. Янським, застосовується в Росії і республіках колишнього СРСР. У США У. Л. Мосс створив свою схожу роботу в 1910 р

техніка визначення групи крові за системою АВО

Методика визначення груп крові за системою АВО за допомогою Цоліклони

Група крові повинна визначатися в приміщенні зхорошим освітленням з дотриманням температурного діапазону від 15 до 25 градусів Цельсія, так як відхилення від цієї норми можуть вплинути на результати дослідження. На платівці або тарілці пишуться ініціали та прізвище пацієнта. Зліва направо або по колу наносять стандартні позначення груп (О (I), A (II), В (III)). Під ними розміщують по краплині відповідні сироватки окремими піпетками для кожного виду. Потім до них додається кров пацієнта. Матеріал для дослідження береться з мочки вуха або пальця. Цього вимагає техніка визначення групи крові за системою АВО.

Чи правомірно також використання еритроцитів,знаходяться в пробірці після того, як утворився згусток. Потрібно, щоб кількість сироватки було більше кількості доданої крові в десять разів. Після цього краплі перемішуються скляними паличками (окремо для кожної). Протягом п'яти хвилин, акуратно похитуючи пластинку, дивляться за появою реакції гемаглютинації. Вона виявляється в тому, що з'являються маленькі червоні грудочки, які зливаються потім в більш великі. Сироватка в цей час практично повністю втрачає колір.

Для того щоб усунути неправдиву гемаглютинаціюпростого склеювання еритроцитів, потрібно через три хвилини додати одну краплю фізіологічного розчину і перевірити, чи зберігається аглютинація. Якщо так, то вона є істинною. Все, визначення груп крові за системою АВО на цьому завершено.

визначення груп крові за системою АВО

тлумачення результатів

В результаті можуть спостерігатися чотири реакції:

  • не відбувається аглютинація з жодною з сироваток - перша група О (I);
  • реакція проявилася з сироватками I (ab) і III (a) - друга група А (II);
  • аглютинація настає з сироватками I (ab) і II (b) - третя група В (III);
  • якщо реакція відбувається з трьома сироватками,потрібно провести додаткову процедуру з реактивами групи АВ (IV), які є стандартними; якщо аглютинація в такий краплі відсутня, можна вважати, що це 4-я група крові АВ (IV).

Експрес-метод для резус-фактора

Методика визначення груп крові за системою АВО передбачає одночасне виявлення резус-фактора (Rh).

Поверхня пластинки попередньо змочують іпишуть на ній «контрольна сироватка» і «сироватка антирезус». Потім під написами розташовують одну-дві краплі потрібних реактивів і додають до них аналізований матеріал. Для цього також можна використовувати кров з пальця (в такій же кількості, як і обсяг сироватки) або еритроцити, що залишилися на дні пробірки після появи згустку (половина обсягу сироватки). Вибір матеріалу на кінцевий результат не впливає. Потім кров і сироватка перемішуються сухий скляній паличкою, після чого протягом п'яти хвилин очікують настання реакції. Для того щоб усунути неправдиві свідчення, через три-чотири хвилини додають ізотонічний розчин натрію хлориду (всього кілька крапель). Визначення групи крові за системою АВО і Rh проводиться дуже часто.

алгоритм визначення групи крові за системою АВО

Якщо аглютинація еритроцитів у краплі зсироваткою відбувається, це вказує на позитивний резус крові. За статистикою Rh + зустрічається у 85% населення планети. Відсутність її дозволяє говорити про резус-негативної приналежності. Якщо аглютинація з'явилася в контрольній сироватці, значить вона прийшла в непридатність. На жаль, алгоритм визначення групи крові за системою АВО не завжди спрацьовує ідеально.

Які помилки можуть бути допущені при даній методиці?

Неточності при визначенні приналежності крові тієї чи іншої групи залежать від наступних причин:

  • Технічних.
  • Біологічної специфіки досліджуваної крові.
  • Неповноцінного характеру стандартних сироваток і еритроцитів.

Технічні помилки

Можливі похибки при визначенні групи крові системи АВО перехресним способом:

  • Неправильно розташовані на платівці сироватки.
  • Невірні кількісні пропорції матеріалу.
  • Використання недостатньо чистих тарілок абопластинок, які стикаються з кров'ю (кожна сироватка повинна набиратися окремої піпеткою, промивати яку потрібно розчином хлориду натрію (в концентрації 0,9%)).
  • Невірна запис аналізованого матеріалу.
  • Недотримання часу, необхідного длянастання аглютинації, - поспішати і враховувати реакцію до закінчення п'яти хвилин не слід, тому що в крові можуть бути слабкі агглютіногени. Перетримувати також не варто, тому що краплі можуть підсохнути з країв і привести до помилкового висновку. Важливо дотримуватися правил визначення групи крові за системою АВО.
    визначення груп крові за системою АВО за допомогою стандартних сироваток
  • Помилкове центрифугування теж може привести до помилкового результату.
  • Температура повітря, що перевищує допустиму,впливає на відсутність аглютинації. Щоб уникнути помилок подібного роду, потрібно використовувати спеціальну сироватку, призначену для роботи в жаркому кліматі. Визначати групи крові потрібно на тарілці або платівці, зовнішня поверхня яких опускається в холодну воду.

Помилки біологічної специфіки

Похибки, пов'язані з біологічною специфікою аналізованої крові, діляться на два типи.

  • Залежать від особливостей еритроцитів.
  • Помилки, обумовлені біологічними особливостями сироватки.

Розглянемо кожен вид більш докладно.

Залежать від особливостей еритроцитів

  • Пізня аглютинація, що порозумівається «слабкими»формами еритроцитів і антигенів. Для того щоб уникнути помилок, визначати групу крові донорів і реципієнтів потрібно з використанням стандартних еритроцитів. Індентіфіціровать агглютиноген А2 слід повторним дослідженням з іншими видами реагентів та іншого посуду, збільшивши час реєстрації реакції.
  • «Панагглютінація» ( «аутоагглютінація») - вміннякрові проявляти однакову реакцію неспецифічного характеру з усіма сироватками, в тому числі з власної. Через п'ять хвилин гострота такий аглютинації слабшає, хоча повинна посилюватися. Подібні випадки спостерігаються у онкохворих, обпалених і ін. В якості контролю необхідно оцінити прояв аглютинації аналізованих еритроцитів в стандартній сироватці четвертої групи і фізіологічному розчині. При «панагглютінаціі» групу крові визначають в результаті потрійного відмивання еритроцитів. Якщо воно не дає потрібного результату, варто провести повторний забір зразка крові в зігріта перед процедурою пробірку і поставити пробу в термоконтейнер, щоб сприяти підтримці температури 37 градусів Цельсія і вище. Потім слід доставити в лабораторію, де зберігається зазначена вище температура і використовуються підігріті фізіологічний розчин, платівка і реактиви.

правила визначення групи крові за системою АВО

  • Іноді еритроцити аналізованої кровірозташовуються як «монетні стовпчики», і їх можна прийняти за агглютінати. Якщо додати дві краплі ізотонічного розчину і м'яко покачати планшет, червоні кров'яні клітини займають правильну позицію.
  • Неповна або змішана аглютинація, яка трапляється у пацієнтів з другої, третьої і четвертої групами в результаті трансплантації кісткового мозку або в перші три місяці після переливання крові 0 (I).

Обумовлені біологічними особливостями сироватки

  • Під час рутинного тестування в результатіпопередньої сенсибілізації виявляються антитіла інший специфічності. Потрібно визначити її і підібрати еритроцити без вмісту антигену, до якого виявлена ​​імунізація. Реципієнту потрібно обов'язково підбирати сумісну донорську кров індивідуально.
  • Відсутні антитіла А і В, що спостерігається у новонароджених і хворих, які страждають від гноблення гуморального імунітету.
  • При утворенні «монетних стовпчиків» аномальнийрезультат потрібно підтвердити, взявши стандартні еритроцити першої групи. Розчин хлориду натрію і погойдування планшета допомагають диференціювати справжні агглютінати і «монетні стовпчики».
    визначення груп крові за системою АВО за допомогою Цоліклони

Помилки, пов'язані із застосуванням неповноцінних стандартних еритроцитів і сироваток

Слабкі сироватки з минулим терміном придатності або мають титр менше 1:32 здатні зароджувати слабку і пізню аглютинацію. Застосування таких реактивів неприпустимо.

Використання негідних стандартних еритроцитівабо сироваток, приготованих в нестерильних умовах і законсервованих в недостатній мірі, призводить до появи «бактеріальної» аглютинації, що має неспецифічну природу.

Існує безліч популярних припущень прогрупах крові системи АВО, що з'явилися безпосередньо після її виявлення в різних світових культурах. Так, наприклад, в 30-ті роки минулого століття в Японії і деяких інших країнах отримала популярність теорія, що зв'язує групу крові з тим або іншим типом особистості. Подібні теорії популярні і на сьогоднішній день.

Є також думка, що людина, яка має групу А, схильний до важкого похмілля, Про пов'язана з хорошими зубами, а група А2 - з найвищим рівнем IQ. Але науково такі твердження не доведені.

Ми розглянули визначення груп крові за системою АВО за допомогою стандартних сироваток.

</ P>